style="width:2.00002in;height:0.48568in" /> 本文是学习GB-T 15699-2013 烟草霜霉病检疫规程. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们
本标准规定了烟草霜霉病检疫的程序和方法。
本标准适用于各种入境烟草种子、种苗和烟叶的霜霉病检疫。
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GB/T 18086—2000 植物检疫 烟霜霉病菌检疫鉴定方法
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
检疫 quarantine
为预防危险性烟草病虫害传播蔓延采取的一种措施。
3.2
烟草霜霉病 tobacco blue mold
又名蓝霉病，由烟草霜霉菌(Peronospora tabacina
)引起，主要为害烟草叶片，亦可系统侵染根、茎
维管束，是一种传播迅速具有毁灭性的病害。
注：该病发生于欧洲、美洲、澳洲，目前我国尚无该病发生，因此作为对外检疫对象。病原为
Peronspora hyoscyami f.sp tabacina Adam,异名 Peronspora nicotianae
Speg,Peronospora tabacina Adam,属鞭毛菌亚门(Mastigo-
mycotin),卵菌纲(Oomycetes),霜霉目(Peronosporales)霜霉科(Peronosporaceae),霜霉属
(Peronospora)。
烟草霜霉病菌为专性寄生菌，烟叶被侵染为害后，出现边缘模糊、褪绿的近圆形斑点，后期形成淡褐
色可脱落的坏死病斑。在适宜温湿度条件下，叶背面病斑长出淡蓝色霉状物，即烟草霜霉病菌的孢囊梗
和孢囊；在一定条件下，病组织内可形成卵孢子。病原菌的寄生专化性及其形态学特征是鉴定烟草霜霉
病的依据。
烟草霜霉病菌的孢囊梗无色，从寄主气孔中伸出，主轴较粗壮，上部呈双叉分枝3次～10次。孢囊
梗长400μm～750μm, 基部直径10μm～12μm;
分枝角度越分越大，末枝呈钝角分叉，叉枝基部略粗
并向末端变尖，两叉枝长短略有差异，较长的一枝常弯曲，另一枝较直，末枝长7μm～14μm;
孢囊在末
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枝顶端同步形成，易脱落，无色或淡黄色，柠檬形或倒卵形，无乳头状突起，大小为(17μm～28μm)×
(13μm～17μm)。
烟草霜霉病的卵孢子壁与藏卵器分离。成熟卵孢子呈橘黄至红褐色，球形，直径为20μm～60μm,
外
胞壁常有瘤状饰纹。
放大倍数为100倍～1000倍。
放大倍数为10倍～50倍。
感量为0.1 g。
转速为1000 r/min～4000 r/min。
孔径为60 μm。
振速为200 r/min。
5.9 0.02 mol/L磷酸缓冲液(pH=7)
乳酚油的配制：液态苯酚20 mL、 乳酸20 mL、 甘油40 mL、 蒸馏水20 mL
混合而成。
10%氢氧化钾溶液的配制：取氢氧化钾10.0 g,加水90 mL 溶解。
根据待检种子总件数按5%～20%取样。在取样时，按对角线五点、棋盘式或分层取样，每个取样
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点取样10 g～20 g,然后混合均匀。
注：旅客携带和国际邮包邮寄的少量烟草种子，取样量视具体情况而定。
不同产地、不同等级的烟叶应分别取样，根据货物批量总件数抽取一定数量的样品，500件以下的
抽查20件，少于20件的全批抽查。在每件中抽取一定数量的带可疑病斑的烟叶作为代表性样品，充分
混合后，按缩分法制备出两份样品，每份1 kg～4kg。
一份为检验样品，另一份为备查样品。按表1抽
取样品份数。
表 1 进境烟叶检疫抽查表
单位为件
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烟草种苗抽样每批按总件数的5%～20%抽查，每批取样检验100株以上，少于100株的全检。
从6.1.1制备的烟草种子中随机抽取5
g,放入三角瓶中，加蒸馏水以完全浸没烟草种子，浸泡30
min,将三角瓶置于振荡器上振荡5min。 将上层洗液转移至离心管，以1000 r/min
的速度离心5 min,
倾去上清液，每个离心管再加入适量蒸馏水，用手摇晃，使沉淀物重新悬浮在蒸馏水中，取几滴悬浮液涂
于载玻片上，每个样品应制备5个～10个载玻片，用显微镜(5.1)在400倍～500倍放大倍数下查看，检
查每个载玻片10个视野(见图1)内的枝状孢子囊梗和孢子囊。
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图 1 10个视野在载玻片上的分布
6.2.2.1 病叶检查
从6.1.2制备的烟叶样品中随机抽取1
kg,在光线充足处，逐片检查，迎光透视，可见明显病斑，若
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发现叶片背面病斑上有密生灰褐色霉层，则用显微镜进一步检验。
6.2.2.2 直接镜检
用解剖针挑取烟叶病斑上的霉状物涂在载玻片上，用显微镜在400倍～500倍放大倍数下检查，观
察病原菌的孢子囊梗和孢子囊，记录其形态特征，并测量孢子囊梗的长度和孢子囊的大小，测定数量应
在30个以上。
6.2.2.3 洗涤检验
剪下霜霉不明显的可疑病斑，用蒸馏水浸泡30 min,待烟叶软化后，用振荡器振荡5
min,将悬浮液 注入离心管，以1000 r/min 的速度离心5 min,
然后倾去上层清液，每个离心管再加入适量蒸馏水，使
沉淀物重新悬浮在蒸馏水中，取几滴悬浮液涂于载玻片上，每个样品应制备5个～10个载玻片，用400
倍～500倍显微镜观测，每个载玻片查看10个视野(见图1),检查树枝状孢子囊梗和孢子囊。
6.2.2.2 的方法镜检病原的孢囊梗和孢囊。对可疑烟苗，应作保
湿检查：将可疑烟苗叶片展平，放入预制的直径为15 cm～20
cm、铺有3层湿滤纸的培养皿中，加盖后
形成小型湿室，置于18℃环境中无光照诱发培养12 h～24h,
然后在双目镜下仔细检查新生的烟草霜
霉病的孢囊梗和孢囊。
从6.1.1制备的样品中随机抽取5 g
烟草种子，置于烧杯中，加入10%氢氧化钾水溶液以完全浸没 烟草种子，煮沸15
min～30
min,直至烟草种子透明，加苯胺蓝(5.8)染色后用乳酚油(5.10)作浮载剂，
然后用显微镜检查，每个样品应检查10个载玻片。
按 GB/T 18086—2000 附录 A 执行。
用血球计数器统计孢子数量，观察80个小格，计算80小格内平均孢子数量，按式(1)计算每毫升悬
浮液中孢子的数量。
b=a×4000000 …………………… (1)
式中：
b—— 每毫升悬浮液中孢子的数量，单位为个；
a——80 小格内的平均孢子数量，单位为个。
取300 mL 的大口径三角瓶4个，每瓶装入培养基80 mL,
用封口膜封住瓶口，121℃(120 kPa)下 灭菌15 min。
在无菌操作下，每瓶中撒播烟种子100粒，15℃~20℃温箱内培养。待种子萌发后，观
察烟苗上的霜霉病症状。
检查种子内部病菌时，将种子浸入1%次氯酸钠溶液10
min,然后置于无菌滤纸上，培养检查。
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按式(2)计算单瓶发病率，按式(3)计算平均发病率。
式 中 ：
y—
—
style="width:2.00002in;height:0.48568in" />
单瓶发病率，以百分数表示；
单瓶内发病的烟苗数，单位为株。
style="width:2.44669in;height:0.48664in" />
…… ……… …………… (2)
…………… ………… (3)
式 中 ：
x— 平均发病率，以百分数表示；
n——4 瓶内发病的烟苗总数，单位为株。
初检合格，可以进入检疫圃的供检材料，在检疫温室用消毒过的土和盆进行育苗盆栽。
在温室内对供检材料在整个生育期进行检查，详细登记检查结果并进行评定。
经检疫未发现被检对象则认为合格，发现被检对象则认为不合格。
7.1.2.1 合格的烟草种子、种苗的处理
7.1.2.1.1 发放检疫放行通知单
签发检疫放行通知单，或在货运单上加盖检疫放行章。经严格包装，由专人送有资质的单位进行隔
离试种检疫。
7.1.2.1.2 国内试种
经隔离试种后未检出被检对象的，交送检人(单位)在国内试种。
7.1.2.2 不合格的烟草种子、种苗的处理
7.1.2.2.1 签发检疫处理通知
签发检疫处理通知单。
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7.1.2.2.2 销毁
应在检疫地原地销毁。
7.1.2.2.3 处理后隔离试种
对于少量有价值的种子，可进行热处理后在检疫温室试种。
热处理过程如下：种子在60℃下通风2 h～3h, 充分干燥后平摊开，厚度小于2
cm, 用干热消毒器
在70℃下处理2天以上。
干热处理后的种子在检疫温室用无菌土、盆试种，若烟苗未感染霜霉病菌，可将繁殖后的种子交送
检人(单位),在国内试种。
经检疫未发现被检对象则认为合格，发现被检对象则认为不合格。
对于合格烟叶，应签发检疫放行通知单，或在货运单上加盖检疫放行章；对于不合格烟叶，该批烟叶
不应入境。
入境烟草种子、种苗和烟叶没有发现检疫对象时，签发植物检疫证书；经检疫不符合贸易合同规定
时，签发检验证书，并制备保存该被检样品和检疫对象的标本，作为索赔依据。
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2014年1月第一版
兴
书号：155066 ·1-47948
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